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LMH细胞的悬浮驯化及其在研发禽腺病毒8型候选疫苗中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 高艳;都兴洋;郭茹;潘青;张峣;杨帆;张宇;刘景利;秦运安;祁小乐;高玉龙;刘慧敏;高宏雷

作者机构：

关键词： LMH细胞;悬浮驯化;禽腺病毒8型

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 12 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为实现禽腺病毒8b型(FAdV-8b)的无血清悬浮细胞的培养工艺,并评价利用该工艺培养FAdV-8b制备的灭活疫苗的免疫效力,本研究采用贴壁的鸡肝癌上皮细胞(LMH细胞)逐步降低培养基中血清含量的方法,筛选适应低血清生长的贴壁细胞株,将其驯化成无血清悬浮生长的LMH细胞,命名为LMH-S。结果显示,经无血清驯化后的悬浮LMH-S细胞增殖稳定,存活率在90%以上。优化摇瓶的接毒工艺,确定摇瓶悬浮培养FAdV-8b工艺为1‰体积比接种病毒,96 h收获病毒。将LMH-S细胞接入Eppendon DASGIP 4联平行生物反应器中培养72 h后,按照体积比1‰接入FAdV-8b,96 h收获病毒测定病毒含量。结果显示,生物反应器中制备的FAdV-8b效价可达10^(8.5)TCID_(50)/mL,利用其制备的灭活疫苗以1 mL/只剂量免疫2周龄SPF鸡评估该疫苗的安全性。以0.5 mL/只免疫2周龄SPF鸡,于免疫后7 d、14 d分别采血,采用ELISA方法检测各组鸡血清中的抗体水平,于免疫后14 d攻击FAdV-8b强毒株。观察攻毒后各组鸡的临床症状及各脏器的剖检变化,采集肝脏病料样品制备病理切片,采用荧光定量PCR方法检测鸡肝脏中的病毒载量。结果显示疫苗的安全性良好。抗体检测结果显示,免疫后7 d抗体无转阳,免疫后14 d抗体的阳转率为73.3%(11/15)。攻毒后4 d剖检免疫组鸡的肝脏均正常；对照组鸡肝脏均有肿大,有的肝脏呈土黄色,质脆,个别有点状出血；病理切片观察可见,免疫组鸡肝细胞仅有一定程度变性,对照组鸡肝细胞广泛变性、局部肝细胞坏死并伴有大量炎性细胞浸润。病毒载量检测结果显示,攻毒后4 d对照鸡肝脏病毒载量极显著高于免疫组鸡(P0.05)。攻毒后14 d所有组鸡肝脏均无明显变化。上述结果表明通过悬浮培养LMH-S细胞制备的FAdV-8b灭活疫苗安全性良好,免疫后可以诱导鸡产生较强的体液免疫反应,并能为免疫鸡提供较好的免疫保护。本研究为FAdV-8无血清悬浮培养放大工艺及疫苗的研制提供了重要的参考依据。

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