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褪黑素通过改善线粒体动力学缓解棕榈酸诱导的牛子宫内膜上皮细胞损伤

文献类型： 中文期刊

作者： 王忆;巩建飞;衡诺;胡樱凡;王蕊;王欢;朱妮;何维;胡智辉;郝海生;朱化彬;赵善江

作者机构：

关键词： 褪黑素;棕榈酸;牛子宫内膜上皮细胞;线粒体动力学;凋亡

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在探究褪黑素对棕榈酸(palmitic acid， PA)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells， BEECs)线粒体动力学的影响及机制。本试验以BEECs为研究对象，分为3组：对照组、PA组和褪黑素组，其中，对照组添加0.2 mmol·L-1 BSA溶剂，PA组添加0.2 mmol·L-1 PA，褪黑素组同时添加0.2 mmol·L-1 PA和100 nmol·L-1褪黑素。本研究通过CCK8法(n=4)和Annexin V-FITC/PI双染法(n=3)检测细胞活力和凋亡情况；利用细胞流式术检测细胞线粒体内的ROS水平(n=3)；进一步使用Seahorse XFe96细胞代谢呼吸动态分析仪检测耗氧率、基础呼吸值、ATP合成能力等线粒体呼吸功能的相关指标(n=4)；qRT-PCR法检测线粒体动力学相关基因MFN1、DRP1和PGC1-α的mRNA表达变化量(n=3)；最后通过Western-Blot法检测线粒体动力学相关蛋白MFN1、p-DRP1、DRP1和PGC1-α的蛋白表达变化量(n=3)。结果显示：与PA组相比，1)添加褪黑素能显著降低BEECs线粒体ROS水平(P＜0.05)，并显著提高BEECs活力和显著降低BEECs凋亡率(P＜0.05)；2)Seahorse结果提示，添加褪黑素能显著提高线粒体基础呼吸值、ATP产量和最大耗氧量(P＜0.05)，此结果表明褪黑素能改善线粒体功能，促进线粒体有氧呼吸，增加ATP产量；3)qRT-PCR结果表明，添加褪黑素能显著降低MFN1、DRP1的mRNA表达量，显著提高PGC1-α的mRNA表达量(P＜0.05)；4)Western-Blot检测发现褪黑素组中MFN1蛋白表达量显著下降(P＜0.05)，p-DRP1/DRP1和PGC1-α蛋白表达量显著上升(P＜0.05)。综上，本研究表明褪黑素可能通过改善BEECs线粒体动力学功能，从而缓解PA诱导下的线粒体氧化应激和提高线粒体呼吸功能，最终增强BEECs活力和降低BEECs凋亡；本研究初步探究了褪黑素对PA诱导BEECs损伤的作用机制，为提高严重NEB奶牛低繁殖力提供了理论依据。

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