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猫细小病毒嵌合抗体基因在CHO-K1细胞中的稳定表达及其特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王文静;薛雨佳;陈慧宇;姚楠;刘明

作者机构：

关键词： 基因工程嵌合抗体;猫细小病毒;哺乳动物表达系统

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 12 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为降低鼠源单克隆抗体(MAb)在猫体内引起的免疫原性,本研究针对猫细小病毒(FPV)制备具有猫源抗体恒定区基因的鼠-猫嵌合抗体.本研究首先克隆具有FPV中和活性的MAb(4F6)的重、轻链可变区基因及猫天然抗体(NAb)重、轻链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-猫重组重、轻链基因片段(CH/CL),构建嵌合抗体表达载体(pMC-CH、pMC-CL),并经菌落PCR鉴定正确后转染CHO-K1细胞,并使用100μg/mL博来霉素(Zeocin)筛选,经有限稀释法将其克隆纯化后经双抗体夹心ELISA与western blot筛选出同时表达鼠-猫重组重、轻链基因的细胞株并命名为CHO-MC,将CHO-MC上清中表达的嵌合抗体纯化后调整浓度为1 mg/mL,间接ELISA检测嵌合抗体的效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性.结果表明,经SDS-PAGE检测鼠-猫嵌合抗体重链和轻链大小分别为55 ku和25 ku,western blot显示鼠源恒定区替换为猫源NAb的恒定区,双抗夹心ELISA显示CHO-MC细胞系在传代至15代仍能够稳定表达嵌合抗体,间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗猫IgG和FPV特异性结合,ELISA及中和效价分别为1:1280(0.78μg/mL)和1:16(62.5μg/mL).本研究首次通过哺乳动物细胞表达系统表达了FPV的嵌合抗体,对治疗FPV抗体类药物的研究具有重要指导意义.

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