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牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白在杆状病毒中的表达及抗原性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 杨木娇;林俊;张娟;王婉;向文杰;薛飞;朱远茂

作者机构：

关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒;GE基因;糖蛋白E;重组杆状病毒表达

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了获得具有良好抗原性的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gE蛋白,本研究采用PCR方法扩增全长gE基因,并在其5’端引入蜂素信号肽(HBM)以增加表达蛋白的分泌,将其克隆至pFastBac1供体质粒中,构建重组质粒pFB-gE。将测序正确的p FB-gE转化至DH10Bac感受态细胞中获得重组杆粒(rBacmid-gE),经PCR鉴定后将阳性r Bacmid-gE转染Sf21细胞,获得重组杆状病毒(rBV)。对不同代次的rBV进行PCR鉴定,结果表明获得了整合gE基因的r BV,且能稳定传代。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,接种rBV的Sf21细胞与gE抗体阳性牛血清反应后出现绿色荧光,而与阴性牛血清不反应,表明g E基因在rBV中获得正确表达。大量培养rBV,收获培养上清液,对重组gE蛋白(rgE)纯化,纯化后的rgE浓度为0.78 mg/mL。对纯化后的rgE进行western blot检测,结果显示,rgE能与g E抗体阳性兔血清和羊血清反应,与IBRV-56(g E基因缺失株)免疫兔血清和健康羊血清均不反应,表明rgE具有较强的反应原性。采用rgE对4只小鼠进行两次免疫,通过间接ELISA方法检测小鼠血清抗体,结果显示,rgE可诱导小鼠产生特异性抗体,表明rgE具有良好免疫原性。本研究为IBRV gE蛋白结构和功能的研究奠定了一定基础,为gE基因缺失疫苗免疫牛与自然感染牛的鉴别诊断提供了物质基础。

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