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猪骨骼肌特异性lncRNA-ssc.21150调控成肌细胞增殖与分化

文献类型： 中文期刊

作者： 何霞;胡杨硕;姚一龙;刘燊

作者机构：

关键词： lncRNA-ssc.21150;肌肉特异性;猪原代成肌细胞增殖分化

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 旨在鉴定并解析猪骨骼肌特异性lncRNA ssc.21150在成肌细胞增殖与分化过程中的调控作用及分子机制。本研究基于前期构建的猪骨骼肌lncRNA全景图谱，发现lncRNA-ssc.21150在猪出生前后骨骼肌中差异表达。试验选用5头1周龄健康雄性藏香猪，在股二头肌注射100 μL(10 mmol·L-1)心脏毒素（CTX）构建骨骼肌再生模型，分别于第0、3、5、7和14 天采集组织样品，每个时间点设3个生物学重复，根据肌肉再生不同阶段评估lncRNA ssc.21150的时序表达规律；同时分离培养猪原代成肌细胞，通过siRNA干扰和过表达载体转染调控lncRNA ssc.21150的表达水平。采用q-PCR检测lncRNA ssc.21150及相关基因（PAX7、Ki67、PCNA、MYOG、MYHC）的mRNA表达，Western blot分析蛋白含量变化，EdU试验和免疫荧光观察细胞增殖与分化情况，核质分离实验确定lncRNA ssc.21150的亚细胞定位，并结合miRDB数据库预测其可能的miRNA互作网络以探讨其ceRNA调控机制。结果显示，lncRNA-ssc.21150在再生第7天表达上调，其表达趋势与肌肉分化标志基因MYHC呈正相关，与增殖标志基因PAX7呈负相关；在猪原代成肌细胞分化过程中，其表达水平持续升高，并在第4天达到峰值。进一步利用小干扰RNA（siRNA）敲低lncRNA-ssc.21150后，细胞增殖能力显著升高，增殖相关基因Ki67与PCNA的mRNA和蛋白水平均明显上调，EdU阳性细胞比例显著增加；而分化相关基因MYOG与MYHC的表达水平明显下降，免疫荧光显示肌管比例及分化指数均显著降低。相反，过表达lncRNA-ssc.21150可促进细胞分化并抑制增殖，呈现与敲低实验相反的表型。核质分离及结果表明lncRNA-ssc.21150主要定位于细胞质，提示其可能通过ceRNA机制发挥功能。进一步基于miRDB数据库构建了其与miRNA的互作网络，揭示其潜在的miRNA“海绵”调控机制。上述结果表明，lncRNA-ssc.21150通过调控肌肉细胞由增殖向分化的命运转变，参与猪骨骼肌的生长发育过程。该研究不仅调控猪骨骼肌发育的lncRNA分子资源库，还首次明确了lncRNA-ssc.21150在猪肌肉发育中的关键功能，为肌肉生物学研究及生长性状的分子育种提供了新的理论依据与潜在靶点。

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