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胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 赵济钰;王璐;孙婧;王春来;李刚;刘思国

作者机构：

关键词： 胸膜肺炎放线杆菌;MnmE基因;基因突变株

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了探究tRNA修饰酶MnmE对胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）生长特性及致病性影响，本研究以APP血清7型S8株为亲本株，分别构建重组质粒pmnmE及pls88-MnmE，随后经PCR验证。将重组质粒pmnmE通过接合转移导入受体菌S8中，利用抗性筛选获得基因突变株（S8△MnmE），并经PCR鉴定，结果显示突变株S8△MnmE构建成功；将重组质粒pls88-MnmE电转化至S8△MnmE感受态细胞中，经抗性筛选得到MnmE基因回补株（cS8△MnmE），后经PCR验证，测序结果显示与原序列一致，表明回补株cS8△MnmE构建成功。并将上述两株菌分别在无抗培养基中传10代鉴定其鉴定遗传稳定性，结果显示均遗传稳定性良好。通过检测不同时间点的OD600nm值并且绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株在不同氨基酸缺失培养基的生长特性，结果显示亲本株（S8）、基因突变株（S8△MnmE）及基因回补株（cS8△MnmE）在化学合成培养基（Chemical define medium，CDM）中增殖速度差异不明显，但在谷氨酰胺（Gln）、赖氨酸（Lys）、甲硫氨酸（Met）、色氨酸（Trp）、谷氨酸（Glu）等氨基酸缺失时，S8△MnmE生长能力发生紊乱（增强/减弱）。通过过氧化氢试验及检测不同时间点OD 值分析两株菌与亲本株的耐受能力及生物被膜形成能力，结果显示，S8△MnmE 在平台期后期生物被膜形成能力升高，对体外过氧化氢(H2O2)应激能力下降。通过对大蜡螟致病性试验及半数致死量(LD50)的测定结果显示，亲本株（S8）的LD50为3.16×108 cfu，突变株（S8△MnmE）的LD50为1.58×109 cfu，致病力降低约5倍。本研究结果首次表明MnmE可参与其生物被膜形成，同时也对耐受能力及致病力产生影响，并在氨基酸缺失营养环境下调节APP生长，该结果为进一步阐明APP的致病机制提供参考。

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