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基于CRISPR/Cas9技术制备NCAPG基因敲除牛成纤维细胞系

文献类型： 中文期刊

作者： 王婷婷;何孟雅;盛家顺;高晨;蔡含芳;付彤;孙宇;高腾云;张天留

作者机构：

关键词： 牛胎儿成纤维细胞;NCAPG基因敲除;CRISPR/Cas9系统;细胞活性

期刊名称：生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2026 年

页码：

收录情况： EI（2025版） ; ; 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建NCAPG基因敲除的牛胎儿成纤维细胞模型，并探究NCAPG基因缺失对细胞活性的影响。【方法】在牛NCAPG基因转录本第6外显子区域设计特异性sgRNA，将其与SpCas9蛋白孵育形成核糖核蛋白（RNP）复合物，通过电转染技术将RNP复合物导入牛胎儿成纤维细胞。随后采用ClonePlusTM技术进行单克隆分离培养，经PCR扩增和测序验证后成功获得NCAPG基因敲除的阳性单克隆细胞株。【结果】ICE软件分析表明，sgRNA的敲除效率达到49%;TA克隆测序结果证实，所获得的单克隆细胞均为杂合子，其靶位点存在5 bp的缺失突变；Western blot检测显示，与野生型细胞相比，敲除细胞株中NCAPG蛋白表达水平极显著降低（P<0.01）;CCK-8细胞活性检测结果表明，NCAPG基因敲除显著抑制了细胞增殖能力（P<0.01），表现为细胞生长速率明显减缓。【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功构建了牛胎儿成纤维细胞NCAPG基因高效敲除方法，并证实NCAPG基因缺失会显著抑制细胞活性，为深入研究牛NCAPG基因的功能及其分子机制提供了重要的实验材料。

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