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牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 唐豪;贺泂杰

作者机构：

关键词： 牛冠状病毒;交叉引物扩增;快速检测

期刊名称：中兽医医药杂志

ISSN： 1000-6354

年卷期： 2023 年 42 卷 04 期

页码：

收录情况： 农林核心（2020版）

摘要： 牛冠状病毒（BCoV）引起犊牛腹泻，对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增（CPA）方法和核酸检测装置相结合，建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明，CPA体系Mg2+最佳物质浓度为2.0 mmol/L，甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度，60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原，层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线，未出现交叉反应。结果显示，CPA BCoV-N具有较高的特异性，CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器，简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增，封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染，对结果的判断更加直观客观，是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。

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