文献类型： 中文期刊
作者： 邢向川;李坤;付元芳;包慧芳;李冬;卢曾军;刘在新;曹轶梅
作者机构：
关键词： 口蹄疫病毒;牛源单克隆抗体;中和抗体;固相阻断ELISA
期刊名称：微生物学报
ISSN： 0001-6209
年卷期： 2022 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版）
摘要： 【目的】为评价O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）灭活疫苗免疫后中和抗体（neutralizing antibodies，NA）水平，建立检测中和抗体的固相阻断ELISA（neutralizing antibodies solid-phase blocking ELISA，NA-SPBE）方法。【方法】本研究以本实验室前期制备的FMDV广谱反应性牛源单克隆抗体E32作为捕获抗体，以生物素标记的FMDV O型型内广谱中和牛源单克隆抗体C4作为检测抗体，经过条件优化建立了检测FMDV O型中和抗体的固相阻断ELISA方法，并对该方法进行了敏感性、特异性、重复性、交叉反应性、与病毒中和试验（Virus neutralization test， VNT）相关性等试验。【结果】抗体E32最佳包被浓度为0.5 μg/mL，O型FMDV灭活抗原最佳稀释浓度为0.25 μg/mL，生物素标记抗体C4-Bio最佳工作浓度为0.06 μg/mL，链霉亲和素-HRP的最佳稀释度为1:40 000。以1.35 log10作为效价判定临界值时，敏感性和特异性分别为97.14%和98.84%。利用该方法分别检测FMDV A型、FMDV Asia1型、BVDV、PRRSV、CSFV、PPRV抗体阳性血清时，均为阴性，未出现交叉反应。该方法批内和批间重复试验的变异系数均<10%，表明其重复性较好。利用该方法与VNT分别对160份血清样品进行检测，二者的相关系数r为0.8075，P<0.0001，相关性显著。【结论】该方法可以检测FMDV O型中和抗体，为FMDV O型灭活疫苗免疫效果评价提供有力技术支撑。
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