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山羊支原体山羊肺炎亚种可视化实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 宋相阳;颜新敏;付磊;陈胜利;郝华芳;高鹏程;刘永生;储岳峰

作者机构：

关键词： 山羊支原体山羊肺炎亚种; 可视化环介导恒温扩增; 实时荧光环介导恒温扩增; 核酸检测

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立快速简便、灵敏度高、特异性强的山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）核酸快速检测方法，选择Mccp的92.1基因序列为靶序列，设计2条外引物、2条内引物和2条环引物，并向反应体系中添加可视化染料羟基溴酚蓝（HNB）或荧光染料（Eva green），分别建立Mccp可视化环介导恒温扩增 （V-LAMP）和实时荧光环介导恒温扩增 （RF-LAMP）检测方法，并对比两种方法的敏感性、特异性、重复性以及两种方法在山羊组织样品中的检测效果。结果显示，两种方法均可检出1.0×10 copies/μL的核酸标准品，灵敏度高；与其他支原体及细菌，如丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯菌等类症病原体，均无交叉反应；V-LAMP、RF-LAMP的变异系数均小于1%；对人工感染的试验样品和临床样品进行检测，两种检测方法结果一致，阳性率为9.09％，并且与实时定量PCR检测结果一致。本试验建立的V-LAMP和RF-LAMP为Mccp流行病学调查和疾病诊断提供了新的临床快速检测方法。

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