数字农科院2.0

基于黏膜sIgA抗体的非洲猪瘟病毒感染早期血清学检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 白昀;谢青云;欧阳伟;甘源;袁厅;赵东明;步志高;邵国青;冯志新

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;sIgA抗体;ELISA;早期诊断

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 目前的非洲猪瘟病毒（ASFV）血清学检测方法存在因采血引起交叉感染风险、抗体转阳滞后影响检测敏感性等问题，因此建立一种无创采样且可实现早期诊断的血清学方法对于在临床上ASFV感染的诊断与监测有重要意义。本研究以人工合成的方式构建了pFastbac1-P30-His重组表达载体，利用杆状病毒-昆虫细胞真核表达系统表达ASFV重组P30蛋白（Sumo-P30），用Ni柱亲和纯化后作为包被抗原，经过一系列条件优化，建立一种以猪口腔液中黏膜sIgA抗体为靶标的ASFV抗体间接ELISA方法。结果显示，真核重组表达的P30蛋白（Sumo-P30）约为47ku，WesternBlot鉴定显示其具有良好的反应原性；经优化确定了ELISA最佳反应条件：包被量为1.0μg·mL－1，5%脱脂乳为最佳样品稀释液，与待检口腔液的最佳混合比例为2∶8，样品反应时间为120min，鼠抗猪IgA-HRP 最佳稀释度为1∶5 000，反应时间为60 min，最佳显色时间为15 min。该方法检测ASFV感染口腔液抗体效价可达1∶32，与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒黏膜抗体阳性口腔液均无交叉反应，具有良好的敏感性和特异性。利用该方法和ASFV商品化ELISA血清抗体检测试剂盒，分别检测感染ASFV强毒株或人工致弱株后同一头猪不同时间点的口腔液和血清样品，口腔液中黏膜sIgA抗体在感染后3～5 d S/P值就显著提升，而血清抗体在监测期内未检测到转阳。检测人工感染或同圈感染自然变异株后不同时间点的口腔液和血清样品，本研究建立的方法与商品化非洲猪瘟病毒血清抗体检测试剂盒检测的阳性符合率为100%，阴性符合率为37.5%，总符合率为61.5%。综上，本研究建立了一种无需采血，以口腔液为样品的ASFV黏膜sIgA抗体ELSIA检测方法，可实现ASFV感染的无创、早期、敏感诊断，为ASFV的监测和防控提供新的技术支持和补充。

分类号：

  • 相关文献

[1]适合早期诊断的非洲猪瘟sIgA抗体量子点免疫层析检测方法建立. 谢青云,易玮婕,李嘉豪,白昀,谢星,袁厅,张越,冯余凡,赵东明,步志高,刘斐,冯志新. 2023

[2]胆道闭锁围生期危险因素的病例对照研究. 宁禹,张明满,吴垒,顾曜隆,陈思,刘威. 2017

[3]黄瓜棒孢叶斑病的Dot-ELISA检测技术研究. 高苇,李宝聚,刘春艳,王勇,石延霞. 2013

[4]小麦-玉米两熟农田除草剂安全高效技术研究与应用. 王贵启,张宏军,王秀,崔海兰,梁双波. 2011

[5]基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌. 包奇,曹梦琪,周雨,郑煜,李长龙. 2016

[6]雏鸡缺锌的早期诊断—羽毛缺损(摘要). 钟永安,葛卉芳,黄美玉,张敏红,柯晓东. 1987

[7]几种长残效除草剂残留导致甜菜药害的早期诊断. 李彦丽,马亚怀,柏章才. 2015

[8]ELISA双抗夹心法检测鸡IBV的研究. 李锋. 1992

[9]非洲猪瘟防控及疫苗研发:挑战与对策. 王涛,孙元,罗玉子,仇华吉. 2018

[10]疫情对生猪市场价格影响研究——兼析非洲猪瘟对产业冲击及应对策略. 胡向东,郭世娟. 2018

[11]我国蓝思白2号猪抗非洲猪瘟特性鉴定. 陈腾,陈其美,葛蕾,刘泽云,周鑫韬,齐宇,缪发明,吴添文,王龙,杨金金,高玉伟,杨金梅,岳慧贤,王立冬,韩桪,温兴钰,王洋,米立娟,蒋依倩,张守峰,李奎,蔡雪辉,葛长利,扈荣良. 2020

[12]恢复养猪生产主要传染病的防控措施. 赛力克·巴合达吾列提,韩若婵,梁琳,崔尚金. 2020

[13]非洲猪瘟——我国养猪业的重大威胁. 罗玉子,孙元,王涛,仇华吉. 2018

[14]我国非洲猪瘟防控策略的哲学思考. 翟新验,张衍海,刘胜旺,郭辉. 2019

[15]非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定. 赵亚茹, 韩蓉, 杨吉飞, 牛庆丽, 关贵全, 罗建勋, 刘光远, 殷宏, GRZEGORZ Wozniakowski, 刘志杰. 2019

[16]非洲猪瘟-我国养猪业的重大威胁. 罗玉子,孙元,王涛,仇华吉. 2018

[17]非洲猪瘟对中国生猪市场和产业发展影响分析. 朱增勇,李梦希,张学彪. 2019

[18]非洲猪瘟疫情影响下城镇居民家庭畜产品消费替代研究-基于北京市与河北省的调研. 朱宁,曹博,秦富. 2020

[19]浅析我国发生非洲猪瘟的运气学特征. 赵国顺,霍宾燕,武小虎. 2020

[20]中国科学家解锁非洲猪瘟病毒三维结构"密码". 饶子和,王祥喜,步志高. 2020

作者其他论文 更多>>