数字农科院2.0

裂谷热病毒NP蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 郭瑶;单逢缘;陆阳;陶丽红;王欣慧;蒋永伦;步志高;钟功勋

作者机构：

关键词： 裂谷热病毒;核蛋白;双抗体夹心ELISA

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 46 卷 10 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立裂谷热病毒(RVFV)的快速检测方法,本研究选取RVFV高度保守的核蛋白(NP)基因,采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白(r NP),经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔,按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体(MAb)5D8和兔源NP多克隆抗体(PAb)rab NP-1,经ELISA检测二者效价均为1:51200。以rab NP-1 PAb作为捕获抗体,5D8 MAb经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化后结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为1.56 mg/mL,0.2μg/孔；检测抗体浓度为1.17 mg/mL,2.24 ng/孔,初步建立RVFV双抗体夹心ELISA抗原检测方法。利用该方法分别对克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)、拉沙病毒(LSV)、新冠病毒(SARS-CoV-2)和RVFV的NP以及RVFV Gn蛋白样品进行检测,结果显示,仅RVFV NP蛋白检测结果呈阳性,其余几种病毒蛋白均为阴性,无交叉反应；利用该方法检测2倍倍比稀释(2^(1)~2^(16))的RVFV复制缺陷型灭活病毒样品,结果显示经214倍稀释后的RVFV检测结果仍为阳性,该方法对RVFV检测限为6.1×10^(-1)FFU/mL；利用同一批次和不同批次包被的ELISA板进行批内和批间重复性检测,结果显示批内和批间变异系数均小于8%。使用RVFV灭活病毒对建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行验证,结果符合预期。本研究建立的RVFV双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于RVFV的快速检测,也可为NP蛋白功能的研究提供技术支撑。

分类号：

  • 相关文献

[1]裂谷热病毒Gn蛋白主要抗原区的表达、纯化及抗原性分析. 夏鹏,魏建超,陆莹梅,武专昌,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,钟登科. 2015

[2]裂谷热病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立. 盖微微,迟航,郑学星,薛向红,高玉伟,王化磊,王铁成,赵永坤,冯娜,黄耕,杨松涛,夏咸柱. 2014

[3]重组杆状病毒表达裂谷热囊膜蛋白的研究. 王清华,王喜军,胡森,步志高. 2006

[4]重组痘病毒表达裂谷热病毒囊膜蛋白及其免疫原性分析. 王清华,胡森,王喜军,步志高. 2007

[5]裂谷热病毒囊膜蛋白基因DNA免疫的研究. 王清华,王喜军,胡森,葛金英,步志高. 2007

[6]5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立. 孙庆歌,杨银辉,张维军,王群,康晓平,李永强,白宇,童铁钢,杨涛,步志高,吴东来. 2009

[7]裂谷热病毒Gc蛋白主要抗原区的表达、纯化及鉴定. 夏鹏,沈丽,魏建超,钟登科,陆莹梅,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,温贵兰,马志永. 2015

[8]裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立. 朱晓文,李林,桑晓宇,高玉伟,胡桂学,冯娜,王铁成,步志高,夏咸柱. 2012

[9]检测牛IFN-γ 双抗体夹心 ELISA 的建立及在牛结核病诊断上的初步应用. 张改梅,贾红,侯绍华,鑫婷,郭晓宇,袁维峰,刘淑清,吴竞,高新桃,李明,董瑞凯,朱鸿飞. 2014

[10]Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立. 梁伟峰,周国辉,刘文铭,李超斯,刘云,于力. 2016

[11]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立. 负炳岭,刘文,李德龙,秦立廷,刘在斯,吴关,祁小乐,王永强,高宏雷,高玉龙,王笑梅. 2012

[12]抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立. 王净,李刚,王鹏,曾妮,穆秀明,高志花,王慧文,史利军. 2011

[13]马流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立. 姬媛媛,郭巍,王晓钧,王征,卢刚,赵立平,李红梅,相文华. 2011

[14]检测犬免疫球蛋白G的夹心ELISA方法的建立. 王正阳,刘平黄,梁琳,陈建飞,吕世明,崔尚金. 2016

[15]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立. 贠炳岭,刘文,李德龙,秦立廷,刘在斯,吴关,祁小乐,王永强,高宏雷,王笑梅,高玉龙. 2012

[16]检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用. 张改梅,贾红,侯绍华,鑫婷,郭晓宇,袁维峰,刘淑清,吴竞,高新桃. 2014

[17]鸡高迁移率蛋白1双抗体夹心ELISA方法的建立. 曲昱蓉,詹媛,仇旭升,丁铲. 2018

[18]马动脉炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立. 胡月,戚亭,赵世华,关平原,王晓钧. 2014

[19]猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA方法建立. 王田田,于瑞明,张莉萍,白英杰,张中旺,潘丽,张全伟,刘新生. 2025

[20]阪崎克罗诺杆菌双抗夹心酶联免疫吸附检测方法的建立. 张欣,王福成,韩先干,祁克宗,宋祥军,董雨豪,蒋蔚. 2024

作者其他论文 更多>>