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天冬氨酸蛋白酶在卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱过程中的作用研究

文献类型： 中文期刊

作者： 罗金;张高峰;崔晶晶;柳志成;赵帅阳;任巧云;胡东生;曹立华;常国勤;殷宏;罗建勋;刘光远

作者机构：

关键词： 长角血蜱;卵形巴贝斯虫;天冬氨酸蛋白酶;RNA干扰;RACE

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本试验以天冬氨酸蛋白酶(AP)为目标基因，探究其表达抑制后对卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱的能力。利用5′/3′-RACE和PCR扩增天冬氨酸蛋白酶基因的全长和CDS，然后根据获得的序列设计siRNA干扰引物。通过颈静脉接种卵形巴贝斯虫的方式构建动物感染模型，将通过RNAi干扰AP基因表达后的长角血蜱置于感染卵形巴贝斯虫牛体表，使蜱叮咬后检测蜱及蜱卵中卵形巴贝斯虫的感染率。结果显示，长角血蜱AP基因全长为1 497 bp，编码区序列为1 176 bp。该基因的RNAi可使AP的表达丰度降低81.91%(P=0.003<0.01)具有显著性差异。感染动物过程中，相较于空白对照组和阴性对照组，qRT-PCR结果表明RNAi组的巴贝斯虫感染率下降。实验结果，表明干扰长角血蜱AP能有效抑制卵形巴贝斯虫的垂直传播，虽然该基因在蜱种间有较高保守性，但是其核酸序列仍然存在一定的差异。该基因第626～644位或第257～275位定点结合可作为潜在的阻断卵形巴贝斯虫传播的疫苗设计靶点，该位点可以发挥抑制/干扰AP的表达的作用。该作用下可有效阻止卵形巴贝斯虫的垂直传播，而且可导致巴贝斯虫的感染水平的显著降低。因此，本研究不仅有助于揭示巴贝斯虫的生物学特性，也为疾病防控提供了潜在的新策略，为公共卫生提供更加有效的干预措施。

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