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非洲马瘟病毒VP7蛋白的可溶性表达及抗体阻断ELISA方法的初步建立

文献类型： 中文期刊

作者： 徐婧;户鑫兵;宋昱庆;张鸿歌;田占成;关贵全;罗建勋;殷宏;魏衍全;独军政

作者机构：

关键词： 非洲马瘟病毒;VP7蛋白;可溶性表达;单克隆抗体;阻断ELISA

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了实现非洲马瘟病毒（AHSV）VP7蛋白的可溶性表达，制备其特异性单克隆抗体，建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法，通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化，以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化，免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术获得VP7蛋白单克隆抗体。通过细胞免疫荧光和Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性，并建立AHSV VP7阻断ELISA方法。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功表达了可溶性重组AHSV VP7蛋白，将纯化的VP7蛋白免疫小鼠筛选制备了2株稳定分泌VP7蛋白单克隆抗体的细胞株，分别为3F7和7H8。经鉴定证明这2株VP7单克隆抗体不仅能与大肠杆菌重组表达的VP7蛋白反应，而且也与BHK-21细胞表达的具有天然构象的重组VP7蛋白反应，具有良好的特异性和反应性。以重组VP7蛋白和单克隆抗体7H8分别为包被抗原和阻断抗体建立了AHSV VP7阻断ELISA方法，检测了277份马血清样本，结果与商品化进口AHSV抗体检测试剂盒测定结果一致。本研究在大肠杆菌表达系统中实现了AHSV VP7蛋白的可溶性表达，制备获得了VP7特异性单克隆抗体，并建立了AHSV VP7阻断ELISA方法，为我国有效防控非洲马瘟的传入提供了技术储备。

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