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绵羊Nectin4基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王秋霞;郭利亚;陈蕾;窦永喜;欧长波;余燕;张艳红;马金友;刘兴友;才学鹏

作者机构：

关键词： Nectin4;巢氏PCR;载体构建;蛋白质表达

期刊名称：中国兽医科学

ISSN：

年卷期： 2016 年 01 期

页码： 116-121

收录情况： CSCD

摘要： 采用巢式PCR方法获得未见报道的绵羊Nectin4基因。根据GenBank上登录的牛的Nectin4mRNA序列信息设计并合成10对引物;从绵羊肺支气管组织中提取总RNA,采用随机引物和Oligo(dT)将其反转录为cDNA;利用巢式PCR原理和PCR引物错配导致非特异反应的特点,改变常规PCR反应条件,将10对引物分为2组,通过两轮PCR即获得大小片段相符的片段;TA克隆后测序证实已成功获得绵羊Nectin4基因的完整ORF,证明本方法可作为一种获取未知基因的方法,较RACE等其他传统技术有明显优势;构建了重组表达质粒pCMV-Myc-Nectin4,在CHO细胞的细胞质中获得高效表达,经...

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