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猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 史鑫琪;季朝阳;陈晓彤;张子博;张鑫;郭慧娟;田璐;王洪峰;陈洪岩;王靖飞;冯力;夏长友;孟庆文

作者机构：

关键词： 猪氨基肽酶N;猪传染性胃肠炎病毒;CRISPR/Cas9;ST细胞

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPNaa668～aa963对其酶活性无影响.因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668～aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15.采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响.利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P＜0.001).利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-Ⅰ和MDA5的转录水平显著上调(P＜0.05).上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案.

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