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N1亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张傲;王佳慧;王文佳;谭斌;张淑琴

作者机构：

关键词： 猪流感病毒;N1亚型;实时荧光定量PCR;鉴别诊断

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立一种灵敏准确检测N1亚型猪流感病毒（SIV）的SYBR Green实时荧光定量PCR方法，本研究靶向N1亚型SIV NA基因的保守区设计特异性引物并构建质粒标准品，通过优化反应条件建立real-time PCR检测方法，对其特异性、敏感性、重复性进行评估，与常规PCR方法进行对比并应用于临床检测。结果显示，优化后所建方法的标准曲线为y=－3.329 7x＋36.881，R2=0.999 5，E=99.6%，质粒标准品的拷贝数与Ct值具有良好的线性关系。该方法特异性良好，与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）无交叉反应。最低检测量为1.03×101 copies/μL，灵敏度为常规PCR的100倍。重复性试验结果显示，组内与组间的变异系数均小于3.0%。所建方法对临床样品的检出率与鸡胚分离检测结果具有较高的符合率。上述结果表明，所建方法灵敏度高且特异性强，可应用于N1亚型SIV的临床样品检测与鉴定。

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