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貉源阿留申病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

文献类型： 中文期刊

作者： 彭倩文;赵永强;邵西群;王桂武;张傲;陈立志;章秀婷

作者机构：

关键词： 貉源阿留申病毒;感染性克隆;病毒拯救;反向遗传操作系统

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在建立貉源阿留申病毒(RFAV)反向遗传系统，为在全基因水平上研究阿留申病毒的致病机制以及疫苗的研制提供平台。前期通过分段克隆成功获得RFAV中间编码区序列M1、M2、M3及末端序列信息。通过无缝克隆技术将RFAV中间编码区序列M1、M2、M3及人工合成的末端编码区序列构建到表达载体pBBSmaⅠ上，测序验证获得了全长质粒pBB-RFAV，将pBB-RFAV转染至F81细胞进行病毒拯救。通过细胞病变观察、PCR检测、qPCR检测病毒相对表达量、间接免疫荧光试验（IFA）、病毒粒子电镜观察共同验证拯救病毒。结果显示，细胞在转染后第48 小时即可观察到明显的细胞病变，PCR检测到RFAV片段，qPCR鉴定发现拯救病毒可在F81细胞上稳定传代，增殖动态与水貂阿留申病毒（AMDV）相似，IFA结果显示感染细胞呈现特异荧光信号，通过电镜观察发现拯救病毒的粒子形态与AMDV已知形态特征基本一致。上述结果表明，构建了RFAV全基因组感染性克隆，并成功拯救出rRFAV，为深入研究阿留申病毒的病原学和免疫学奠定了基础。

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