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美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术（RPA）检测方法的建立及其应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王方洲;孙普;张婧;李平花;马雪青;赵志荀;李凤娟;李国秀;李冬;王健;袁红;曾巧英;刘在新;卢曾军

作者机构：

关键词： PRRSV;美洲型;RPA;应用;ORF5基因

期刊名称：病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版）

摘要： 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化，其引起的猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法，本研究分析了国内美洲型全基因组序列，利用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA），设计合成特异性引物和探针，优化反应体系和条件，建立美洲型PRRSV实时荧光RAP检测方法，通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测，评价该方法的检测能力，并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示，该方法在42℃、20 min内即可完成检测，最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL，且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应，特异性好；检测50份田间样品该方法的阳性检出率为34%，与实时荧光RT-PCR检测结果的符合率为100%;ORF5序列分析显示检出阳性样品中NADC30-Like毒株占比为88%。结果表明，本研究建立的美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法特异性强、敏感性高，满足PRRSV的快速诊断和流行病学调查。

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