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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT-PCR检测方法的建立和应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王方洲;张婧;马雪青;李平花;包慧芳;王健;赵志荀;李娇阳;李国秀;刘在新;卢曾军;曾巧英;孙普

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;一步法多重RT-PCR;建立;应用

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的准确性，本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列，针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物，建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法，通过特异性、敏感性和重复性试验，与实时荧光RT-PCR对比检测田间样品，评价该方法的检测能力。结果显示，本研究筛选出了3对特异性引物，成功建立了PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法，扩增目的片段大小分别为408 bp、548 bp、689 bp，至少扩增出任意一条特异性条带即可判为阳性；对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒均无特异性条带扩增；检测美洲型经典毒株VR-2332、高致病性毒株GSWW15株和NADC30样毒株GSWW18的最低病毒量范围为25～50 TCID50/mL；45份田间临床样品的比对检测结果显示，本研究建立的多重RT-PCR检测方法检出阳性率为33.3%，与实时荧光RT-PCR方法的检测结果符合率为95.6%。结果表明，本研究建立的PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于PRRSV流行病学的调查，具有良好的应用前景。

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