数字农科院2.0

蓝舌病毒血清1型VP5蛋白的截短表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 刘学春;户鑫兵;宋昱庆;孟凡华;田占成;关贵全;殷宏;独军政

作者机构：

关键词： 蓝舌病毒;VP5蛋白;截短表达;单克隆抗体

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏嗜性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质粒pET-sumo-VP5Δ79aa。将该重组质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG分别在37 ℃和16 ℃条件下进行诱导表达和可溶性分析，经SDS-PAGE检测，重组VP5Δ79aa蛋白主要以包涵体形式表达。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组VP5Δ79aa蛋白，得到与预期大小相符的单一目的条带。纯化后的重组VP5Δ79aa蛋白经不同浓度梯度的尿素透析复性后，将其免疫雌性BALB/c小鼠（6～8周龄），取免疫后脾细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接ELISA、免疫荧光和Western-blot分析，筛选得到2株反应性和特异性良好的单克隆抗体4A10和5H11，其不仅能与重组VP5Δ79aa截短蛋白以及重组全长VP5蛋白反应，而且能特异识别BTV-1感染细胞中的天然VP5蛋白，这为深入研究BTV VP5蛋白的生物学功能及其抗原表位鉴定奠定了基础。

分类号：

  • 相关文献

[1]抗传染性法氏囊病病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备与初步应用. 张宁,高宏雷,高玉龙,李俊山,王晓艳,冉多良,王笑梅. 2007

[2]鸭肠炎病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 李慧昕,刘胜旺,韩宗玺,邵昱昊,刘晓丽,华育平,刘娣,孔宪刚. 2013

[3]蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定. 孙晶,孙恩成,刘二战,孙亮,徐青元,杨涛,吴东来. 2014

[4]蓝舌病毒VP6蛋白的原核表达及抗体制备. 张国芮,独军政,高闪电,田占成,常惠芸,殷宏,薛慧文. 2017

[5]蓝舌病毒NS2蛋白的抗体制备及鉴定. 张国芮,独军政,高闪电,田占成,Darien Kheder Ali Mohamed,康棣,郭艳妮,薛慧文,殷宏. 2019

[6]传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选. 王念,张礼洲,陈玉明,卢珍,高立,高玉龙,王永强,高宏雷,刘长军,崔红玉,李凯,王笑梅,祁小乐. 2015

[7]非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备. 范亚亚,王轩莹,户鑫兵,田占成,关贵全,罗建勋,殷宏,郑玉姝,独军政. 2023

[8]牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定. 李娇,薛飞,朱远茂,祖立闯. 2008

[9]猪圆环病毒3型ORF2基因的截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立. 何博,王勤,欧云文. 2020

[10]猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备. 欧云文,潘琴,汪洋,代军飞,任绍科,张洋,张杰. 2023

[11]猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立. 欧云文,潘琴,汪洋,代军飞,任绍科,张洋,翟佳佳,张杰. 2024

[12]基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用. 欧云文,潘琴,汪洋,代军飞,任绍科,张洋,张杰. 2024

[13]牛结节性皮肤病病毒A33R蛋白的截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立. 包燕玲,宋昱庆,户鑫兵,钟匀汝,田占成,苟惠天,关贵全,殷宏,独军政. 2025

[14]非洲马瘟病毒VP2蛋白的截短表达及免疫原性分析. 王轩莹,范亚亚,户鑫兵,徐婧,张鸿歌,田占成,苟惠天,郑玉姝,关贵全,罗建勋,殷宏,独军政. 2024

[15]甘蔗花叶病毒单克隆抗体的制备及其血清学检测应用. 饶黎霞,黄德青,周雪平,钱亚娟,吴建祥. 2018

[16]柑橘碎叶病毒(CTLV)单克隆抗体的制备及其检测应用. 宋西娇,段硕,洪健,周常勇,周雪平,吴建祥. 2017

[17]检测南方水稻黑条矮缩病毒胶体金免疫试纸条的建立. 吴建祥,饶黎霞,陈浙,傅帅,周雪平. 2017

[18]牛轮状病毒抗原捕获ELISA方法的建立与应用. 常继涛,张佳昕,于力. 2018

[19]牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测. 周曼莉,周玉成,张海威,乔连江,杨艳玲. 2019

[20]柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用. 李莎,梁思婷,赵其平,韩红玉,朱顺海,翟颀,杨斯涵,黄兵,董辉. 2015

作者其他论文 更多>>