文献类型： 中文期刊
作者： 白宇彤;黄志成;李章程;陈胜利;兰仕梅;李延召;刘爽;郝华芳;储岳峰;刘冠慧
作者机构：
关键词： 牛支原体;原核表达;多克隆抗体;免疫原性
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2022 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）
摘要： 为探究牛支原体MBOVPG45＿0212蛋白的免疫学功能，以牛支原体基因组DNA为模板，PCR扩增MBOVPG45＿0212基因并测序分析；经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，Ni-NTA纯化目的蛋白，Western-blot验证纯化重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况；将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体，Western-blot测定多克隆抗体对牛支原体天然蛋白的识别。PCR结果显示，MBOVPG45＿0212基因全长约1 014 bp；pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h成功表达大小约43 ku目的蛋白；纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应，免疫小鼠血清效价达到 1︰51 200以上，显示重组MBOVPG45＿0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45＿0212蛋白，并制备其高效价的多克隆抗体，为其后续生物学功能研究奠定了基础。
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