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猪脑心肌炎病毒HB10株cDNA感染性克隆的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 于会彬;黄丽;张元峰;李江南;蔡雪辉;崔尚金;翁长江

作者机构：

关键词： 猪脑心肌炎病毒;cDNA感染性克隆;转录转染;病毒拯救

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2015 年 37 卷 09 期

页码： 665-668

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果显示,转染细胞36 h后,出现典型的细胞病变。拯救病毒rEMCV-HB10全基因组经测序鉴定显示,与亲本病毒开放阅读框比较,其仅在1D基因出现两个核苷酸突变:即A37G(R13K)和G187C(M63I),该突变可以作为区别亲本病毒的标志。间接免疫荧光和生长曲线试验结果显示,这两个突变并不影响VP1蛋白的表达及病毒拯救,并且拯救病毒与亲本病毒具有相似的生长特性。本研究构建了感染性EMCV-HB10 cDNA克隆,为深入研究EMCV的致病分子机理提供了有效的反向遗传操作平台。

分类号： S855.3

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