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利用单B细胞分选技术制备猪瘟E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 马中元;郑君佐;梁志博;潘丽;曾巧英

作者机构：

关键词： 猪瘟;E2;单B细胞;表位;ELISA

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法，用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先，构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC，通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白；其次，用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠，通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后，半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链，测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体，再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞，制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明，本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体，即mAb3A9（IgG1，kappa）和mAb4F7（IgG2a，lambda），分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL39 和 259GNTTVKVHASDERGP273。此外，用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法，在血清样本检测过程中，均展现出优异的诊断敏感性（97.49%，95.97%）及特异性（96.08%，94.38%），该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。

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