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猪流行性腹泻病毒非结构蛋白Nsp15互作宿主蛋白的筛选及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 孙金磊;于瑞明;张莉萍;张中旺;王永录;潘丽;张全伟;刘新生

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻;非结构蛋白;蛋白互作;病毒复制

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年

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收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 为了筛选和鉴定与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus， PEDV)非结构蛋白15 (non-structural protein 15， Nsp15)互作的关键宿主蛋白。通过IP/pull down beads结合质谱技术筛选、鉴定与PEDV非结构蛋白Nsp15互作的宿主蛋白，并利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)、激光共聚焦验证其互作关系，最后应用western blotting和RT-qPCR初步明确宿主蛋白SLC25a3与PEDV之间的作用关系。本研究成功构建了Nsp15重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-Flag-Nsp15，并筛选出与PEDV Nsp15互作的宿主蛋白SLC25a3。免疫共沉淀及激光共聚焦结果显示PEDV Nsp15与宿主蛋白SLC25a3存在互作关系。宿主蛋白SLC25a3能够显著抑制PEDV复制且呈现剂量依赖性。本研究为进一步探究SLC25a3在抗PEDV免疫应答中的作用及机制提供了参考。

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