文献类型： 中文期刊
作者： 涂赟;于瑞明;张莉萍;王永录;潘丽;刘霞;杜晓华;刘新生
作者机构：
关键词： 猪流行性腹泻病毒;Nsp8;免疫共沉淀技术;HSPA8
期刊名称：微生物学报
ISSN： 0001-6209
年卷期： 2024 年 64 卷 10 期
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）
摘要： 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是一种能引起严重腹泻、脱水的肠道病毒，PEDV的广泛流行对生猪养殖产业造成巨大经济损失，目前仍无有效的预防和治疗手段。Nsp8是一种参与PEDV复制的重要非结构蛋白，其存在相互作用的宿主蛋白尚不清楚。【目的】筛选与PEDV Nsp8互作宿主蛋白，初步探究互作宿主蛋白对PEDV复制的影响，为寻找PEDV新的关键性治疗靶点提供理论基础。【方法】利用真核表达载体pcDNA3.1(+)成功构建PEDV Nsp8真核表达质粒，通过免疫共沉淀、质谱分析及激光共聚焦等技术筛选能够与其相互作用的宿主蛋白，进一步在LLC-PK细胞中通过过表达、敲低等方法探究互作宿主蛋白对PEDV复制的影响。【结果】质谱检测筛选到Nsp8潜在互作宿主蛋白36个，验证了宿主蛋白热休克蛋白成员8 (heat shock protein member 8, HSPA8)与Nsp8相互作用，在LLC-PK细胞中过表达HSPA8能够剂量依赖性抑制Nsp8蛋白过表达，而且在蛋白质和转录水平显著剂量依赖性抑制PEDV复制；干扰内源性HSPA8表达能够显著促进PEDV复制，TCID50和间接免疫荧光试验检测(indirect immunofluorescentassay,IFA)结果进一步证明了HSPA8抑制PEDV复制。【结论】本研究筛选出PEDV Nsp8的互作宿主蛋白HSPA8，并且证明HSPA8能显著抑制PEDV复制，为设计以HSPA8为靶点的预防或治疗药物提供新思路。
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