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牛流行热病毒G_1抗原表位基因在大肠杆菌中的表达、纯化及抗原性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 郑福英;蔺国珍;邱昌庆

作者机构：

关键词： 牛流行热病毒;G_1抗原表位基因;大肠杆菌;表达;鉴定

期刊名称：微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2007 年 47 卷 3 期

页码： 498-502

收录情况： CSCD

摘要： 从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G_1抗原表位区基因,与表达载体pGEX-4T-1连接,成功构建重组质粒pGEX-G_1。重组质粒转化BL21(DE3),以IPTG进行诱导,并确定了最佳表达条件的IPTG浓度为0.1mmol/L、反应温度为16℃、诱导时间为18h。可溶性表达的目的蛋白经Glutathione Sepharose TM~(4B)介质纯化,纯度达80%;以包涵体形式存在的重组蛋白以2%的脱氧胆酸钠洗涤、0.5%的N-十二烷基肌氨酸钠溶解、透析复性、Glutathione Sepharose TM~(4B)纯化后,纯度达85%以上。Western blot试验表明纯化的目的蛋白有良好的反应原性。经间接ELISA检测,测得牛流行热病毒12份阳性血清的OD_(490)值平均为1.813±0.231,12份阴性血清的OD_(490)值平均为0.359±0.032,差异极显著(P<0.01)。将重组蛋白作为抗原免疫兔子,试验兔均产生了高滴度的抗体,证实该蛋白有免疫原性。将目的蛋白作为包被抗原,测得8份狂犬病病毒阳性血清的OD_(490)值平均为0.324±0.031,与所测12份阴性血清的OD_(490)值接近,说明不存在交叉反应。以上结果均证实纯化后的重组蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA试剂盒。

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