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布鲁菌抗体阻断ELISA检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 宋国栋;葛家振;Weldeab Solomon;刘一健;高鹏程;王梓晴;郭双双;谢莹影;储岳峰;郑福英

作者机构：

关键词： 布鲁菌;脂多糖;单克隆抗体;阻断ELISA

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 8 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 旨在使用布鲁菌脂多糖(LPS)和HRP标记的单克隆抗体(HRP-mAb)建立阻断ELISA抗体检测方法,并评价其检测性能以及初步应用.结果显示,当布鲁菌LPS的包被量为400 ng/孔,10g/L阿拉伯树胶溶液封闭2 h,血清稀释4倍后37 ℃孵育20 min,稀释度为1∶6 000的HRP-mAb 37 ℃孵育20 min,显色10 min时为最佳反应条件,该方法的临界值为PI=46.7％.该方法的最低检测水平为3.125 IU/mL,与常见的细菌病阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数均小于10％,具有良好的敏感性、特异性和重复性.该方法可检测牛、羊、鹿、犬等宿主的布鲁菌阳性血清.使用建立的阻断ELISA方法检测284份临床血清,与虎红凝集试验、竞争ELISA和间接ELISA试剂盒的符合率分别达到97.18％(276/284)、98.59％(280/284)和96.13％(273/284).结果表明,建立了敏感性高、特异性好、重复性好的布鲁菌抗体阻断ELISA检测方法,全部反应过程不超过1 h,并且可检测多物种布鲁菌阳性血清.该方法弥补了我国布鲁菌抗体阻断ELISA检测技术的空白,为布鲁菌病的快速诊断以及免疫水平监测提供了技术支持.

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