数字农科院2.0

抗犬瘟热病毒VHH抗体噬菌体库的构建与筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 王召阳;蒋亚君;刘雪婷;林伟东;鑫婷;侯绍华;郭晓宇;朱鸿飞;贾红

作者机构：

关键词： 犬瘟热病毒(CDV);VHH抗体;M13噬菌体展示;真核表达

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 NULL 卷 6 期

页码： 1685-1693

收录情况： 北大核心（2020版） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为构建特异性犬瘟热病毒(CDV)的纳米抗体库,获得抗CDV的VHH抗体,本试验利用CDV免疫羊驼,四免后采集外周血淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,利用巢式PCR扩增纳米抗体序列.将目的片段连接至pComb3x噬菌体展示载体,并电转至TG1宿主菌,挑取40个克隆进行菌液PCR验证,随机挑选13个阳性单克隆进行测序,计算抗体库库容量,加入辅助噬菌粒拯救获得的噬菌体展示抗体库.经过3轮淘选,富集对CDV结合力高的噬菌体.利用毕赤酵母系统表达两株结合力高的噬菌体,经Ni柱纯化后,利用ELISA进行噬菌体结合力的鉴定.结果表明,四免后羊驼血清效价达1∶25 000,达到建库要求,构建的噬菌体展示文库库容量达3.41*10~9 PFU.经过3轮淘选,特异性抗体库经稀释100倍后,ELISA检测仍为阳性,表明特异性结合CDV的噬菌体得到明显的富集.ELISA结果表明,两株纯化的纳米抗体与CDV的反应性显著高于对照组.以上结果提示,本研究成功筛选出2株特异性结合CDV的VHH抗体,为VHH抗体在犬瘟热的诊断和治疗方面的应用奠定了基础.

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]犬细小病毒VHH抗体的文库构建、表达及其鉴定. 冯倩倩,王召阳,袁维峰,姜一曈,庞忠宝,朱鸿飞,贾红. 2023

[2]犬瘟热病毒感染小鼠脾淋巴细胞所引起的主要基因表达变化. 仝明薇,易立,程悦宁,王建科,赵航,程世鹏,孙长英,王文宪. 2014

[3]貉源犬瘟热病毒的分离鉴定及其H基因的序列分析. 郭抗抗[1,闫喜军,柴秀丽,张蕾,赵建军. 2013

[4]犬瘟热病毒受体及其跨宿主感染. 王雅文,赵建军,闫喜军. 2017

[5]猪A组轮状病毒主要蛋白的编码基因DNA疫苗联合免疫的研究. 高艳,都兴洋,智海东,王洪峰,张峣,付朝阳,高宏雷,王春凤. 2017

[6]抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析. 宫晓炜,郑福英,蔺国珍,曹小安,王光华,周继章,才学鹏. 2011

[7]O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达. 刘萍,丛国正,杨孝朴,沈小燕,邵军军,独军政,林彤,王光华,易华山,常惠芸,谢庆阁. 2007

[8]猪囊尾蚴HSP70-4基因克隆及其真核表达. 殷静,骆学农,郭爱疆,孙铭苑,王帅,杨兴,才学鹏. 2015

[9]羊痘病毒多表位核酸疫苗的构建及表达. 陈轶霞,刘俊林,王明明,余继英,骆学农. 2013

[10]柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析. 孔春林,韩红玉,李洋,董辉,姜连连,李婷,赵其平,朱顺海,黄兵. 2012

[11]兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东. 2011

[12]柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及其免疫保护性评价. 杨斯涵,韩红玉,赵其平,朱顺海,黄兵,翟颀,李莎,梁思婷,董辉,杨亮宇. 2015

[13]禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立. 石星明,赵妍,王玫,张晶,魏秀英,杨桂花,高宏博,全炎铭,黄婷婷,张晓艳,崔红玉,王云峰. 2010

[14]抗菌肽Shiva 1a基因真核表达载体的构建及序列分析. 宫晓炜,郑福英,蔺国珍,曹小安,王光华,周继章,才学鹏. 2011

[15]用蛋白芯片检测野鸟禽流感免疫抗体. 王秀荣,赵玉辉,包红梅,孙晓东,曾显营,路冰,陈化兰. 2011

[16]猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达. 夏吉瀚,王超群,阮进学,杨述林,李奎. 2012

[17]猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达. 宋岩,师东方,樊琛,刘胜旺,魏华,李一经. 2005

[18]稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立. 刘霄卉,罗军荣,斯日古楞,周建华,马学恩. 2011

[19]口蹄疫病毒L基因真核表达载体的构建及表达. 刘萍,丛国正,杨孝朴,常惠芸. 2007

[20]柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达. 朱雪龙,黄兵,韩红玉,赵其平,朱顺海. 2016

作者其他论文 更多>>