文献类型： 中文期刊
作者： 包燕玲;宋昱庆;户鑫兵;苟惠天;田占成;关贵全;殷宏;独军政
作者机构：
关键词： 结节性皮肤病病毒;L1R△182-204aa蛋白;大肠杆菌表达;单克隆抗体
期刊名称：中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 结节性皮肤病（LSD）是由结节性皮肤病病毒（LSDV）感染牛而引起一种传染病。LSDV基因组长约151 kb，含有156个开放阅读框（ORF），其中L1R基因所编码的L1R蛋白可以诱导机体产生中和抗体，也可作为诊断抗原用于建立诊断方法。为制备LSDV L1R特异性单克隆抗体，本研究将L1R基因截去编码跨膜区（182-204 aa）片段后克隆至pET-28a原核表达载体，诱导表达并纯化重组L1R△182-204aa蛋白，随后将其免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合和亚克隆得到杂交瘤细胞株，将其接种小鼠制备腹水并进行效价测定，通过Western blot和IFA验证其特异性。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功表达并纯化获得大小为26 kDa的重组LSDV L1R△182-204aa蛋白，将其免疫小鼠筛选制备了两株能稳定分泌单克隆抗体的细胞株，命名为8A3和8F4，经Western blot和IFA鉴定，两株单克隆抗体不仅能识别大肠杆菌表达的重组L1R△182-204aa蛋白，而且也能与BHK-21细胞表达的重组L1R△182-204aa蛋白发生特异性反应。本研究不仅为LSDV抗体诊断方法的建立和新型疫苗的研发提供了实验材料，同时为深入探索L1R蛋白的生物学功能奠定了基础。
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