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产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的制备及其竞争ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 狄娜;杨金玲;高鹏程;彭婕;李学瑞;储岳峰

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌;ε重组蛋白;单克隆抗体;竞争ELISA;抗体检测

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为建立检测产气荚膜梭菌（Cp）ε毒素抗体的竞争性酶联免疫吸附（ELISA）检测方法，首先利用纯化的产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白，免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选并获得1株稳定分泌特异性抗体的单抗6B9。再以Cp ε毒素重组蛋白为包被抗原，6B9为竞争性抗体，HRP-山羊抗鼠IgG为二抗，通过优化反应条件，建立了Cp ε毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示，蛋白包被浓度为3.0 μg/mL，待检血清不稀释，单抗1∶12 000稀释，二抗1∶20 000稀释，避光显色15 min为所建立竞争ELISA方法的最优反应条件。该方法检测羊血清样本的阳性临界值为27.048%，阴性临界值为19.373%，检测羊阳性血清敏感度为1∶1 024，批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β1、β2毒素，腐败梭菌、大肠杆菌以及支原体阳性血清均无非特异性反应。检测126份临床绵羊血清样品，该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为88.52%，阴性符合率为96.92%，总符合率为92.86%。结果表明，本研究成功获得1株高特异性的产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体，并据此建立了产气荚膜梭菌ε毒素抗体竞争ELISA检测方法。该方法重复性佳、特异性强、灵敏度高，从而为精准检测动物临床血清中的ε毒素抗体，评价动物梭菌疫苗的免疫效果提供技术支撑。

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