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牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析

文献类型： 中文期刊

作者： 黄志成;白宇彤;陈胜利;李章程;兰仕梅;李延召;刘爽;郝华芳;刘冠慧;储岳峰

作者机构：

关键词： 牛支原体;脂蛋白;LppB;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因,并进行原核表达与纯化,制备其多克隆抗体,研究其对天然蛋白的识别能力.以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板,PCR扩增LppB基因,测序并比对分析;将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达产物用Ni-NTA纯化,Western blot方法验证纯化重组蛋白,测定其反应原性;将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其ELISA效价,Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别.结果显示:PCR扩增的LppB基因全长约1 860 bp,与预期大小相符;LppB主要为可溶性表达,大小约为74kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白,LppB蛋白具有良好的反应原性;制备出小鼠抗LppB多克隆抗体,ELISA效价为1∶25 600,能够识别天然LppB蛋白.本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体,为LppB功能研究奠定基础.

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