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分子伴侣TF促进塞内卡病毒VP2蛋白在大肠杆菌表达

文献类型： 中文期刊

作者： 杨锐;茹毅;郝荣增;李亚军;杨洋;任蕊芳;卢炳州;毛玉涵;张越;郑海学;张勇;赵兴绪

作者机构：

关键词： A型塞内卡病毒（SVA）;病毒结构蛋白2（VP2）;原核表达;分子伴侣;可溶性表达;免疫原性

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2023 年 31 卷 09 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： A型塞内卡病毒（Senecavirus A, SVA）是一种新近流行的小RNA病毒，严重危害着全球养猪业的健康发展。SVA病毒结构蛋白2（viral structural protein 2, VP2）在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用。为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2，并系统分析其免疫原性，本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础，构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2。然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）感受态细胞，利用分子伴侣TF（trigger factor）在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性，诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白。纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠（Mus musculus），通过间接ELISA检测血清抗体水平，病毒中和试验测定中和抗体滴度，流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群，以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况。结果表明，利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白，并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应，免疫组小鼠的血清抗体效价可达1∶32 000，中和抗体水平可达1∶128，免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组（P＜0.001），干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组（P＜0.001）。本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白，且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性，能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据。

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