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乙型脑炎病毒结构蛋白PrM单克隆抗体的制备和分析

文献类型： 中文期刊

作者： 陈梦莉;谢丰玉;张彤;郑家杨;魏建超;李宗杰;李蓓蓓;邱亚峰;马志永;邵东华;刘珂;冯秀丽

作者机构：

关键词： 日本乙型脑炎病毒;PrM/M;单克隆抗体

期刊名称：畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)结构蛋白PrM单克隆抗体,首先根据NCBI参考序列(GQ918133.2)设计PrM引物扩增目的基因,将目的基因构建至pCold Ⅰ原核表达质粒上;然后鉴定阳性克隆质粒并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达蛋白纯化后.免疫6周龄BALB/c小鼠,进行杂交瘤细胞融合,并对融合细胞进行克隆筛选;最后将筛选阳性的杂交瘤细胞制备腹水获取单克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,Western blot和间接免疫荧光检测抗体特异性和病毒感染过程.结果显示:成功构建了 pCold Ⅰ-PrM原核表达载体,PrM蛋白在1mmol/LIPTG 16 ℃过夜诱导培养时表达量较高,亚克隆后经腹水制备获得2株针对PrM区域的单克隆抗体,Western blot和间接免疫荧光检测2株单抗能够特异性识别JEV的PrM区蛋白,获得的单抗能够鉴定JEV在细胞内的感染过程.本研究为进一步研究JEV鉴别诊断技术和生物学功能提供基础.

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