文献类型： 中文期刊
作者： 杜煜;孙茂文;曹丽艳;孔祥雨;李想通;张宇;王琦;郑海学
作者机构：
关键词： 非洲猪瘟病毒;I215L蛋白;原核表达;多克隆抗体
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 本研究聚焦于非洲猪瘟病毒（ASFV）I215L基因编码的泛素结合酶（UBCv1），对其进行原核系统表达并制备了多克隆抗体。以ASFV CN/GS/2018株为模板，成功扩增I215L基因并插入原核表达载体，形成重组质粒pET28a-I215L。经大量诱导表达后，利用切胶方法成功纯化出重组蛋白。将提纯后的I215L蛋白与佐剂混合对动物进行多次免疫，获得鼠/兔抗I215L蛋白的多克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价，鼠抗I215L多抗效价达到1∶64 000以上，兔抗I215L多抗效价达到1∶512 000；间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western-blot）结果显示，该多抗具有特异性识别ASFV感染后I215L蛋白的能力，并且显示出良好的效果。本研究在体外表达并纯化了ASFV I215L蛋白，成功获得鼠/兔抗I215L蛋白的多克隆抗体，这为后期ASFV I215L蛋白的结构解析、功能研究及病毒相关致病机制的探索奠定了基础。
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