非洲猪瘟病毒分子信标荧光定量PCR检测方法的建立
文献类型: 中文期刊
作者: 钟健豪;高寒;杨吉飞;邝麒元;高校鹏;李跃;牛庆丽;关贵全;殷宏;张桂红;卢刚;孙彦阔
作者机构:
关键词: 非洲猪瘟病毒;分子信标;实时荧光定量;检测方法
期刊名称:中国兽医科学
ISSN: 1673-4696
年卷期: 2024 年
页码:
收录情况: 北大核心(2023版) ; ; CSCD(2023-2024年度) ; ; 科技核心(2024版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 本试验旨在利用新型荧光探针-分子信标建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子信标实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据ASFVB646L基因序列的保守区域设计特异性引物和分子信标探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立标准曲线,测定本方法的敏感性、特异性和重复性;并通过检测207份临床样本,比较本方法与国家标准qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒之间的符合率以及得出 kappa系数。结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,相关系数为 0.997 4,最低检出浓度为1copies/μL,且与5种常见猪源病原体之间无交叉反应,组内与组间的变异系数均小于1.81%;临床样品检测结果显示,本方法与国家标准 qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒的总体符合率分别为 97.10%和 98.55%,kappa系数分别为 0.910 4和 0.955 6。结果表明,本试验建立的ASFV检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、检测结果可靠,为 ASF的检测和该病的防控提供了技术支持。
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