非洲猪瘟病毒H3基因序列分析蛋白结构预测及其亚细胞定位
文献类型: 中文期刊
作者: 亢伟芳;王悦;任静静;彭江玲;朱国强;李丹;杨文萍;郑海学
作者机构:
关键词: 非洲猪瘟病毒;H3基因;蛋白结构预测;亚细胞定位
期刊名称:中国兽医科学
ISSN: 1673-4696
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; CSCD(2023-2024年度) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 在前期研究中本实验室构建了敲除H3 (Hypothetical protein 3) 基因的非洲猪瘟病毒 (ASFV) 毒株,并进一步通过动物实验表明敲除该基因对于ASFV的毒力没有影响,推测该蛋白可能是ASFV的非结构蛋白。为进一步了解ASFV H3基因及其编码蛋白的理化性质和结构特征,从NCBI数据库中搜集到71株包含H3基因的ASFV毒株进行序列比对并绘制了H3基因的分子进化树。利用在线软件分析ASFV H3蛋白的理化性质和组成结构,通过在HEK-293T细胞中转染真核表达质粒pRK-H3-GFP确定其亚细胞定位。结果表明,H3基因在 Ⅰ 型和 Ⅱ 型ASFV毒株中具有较高的同源性。H3蛋白包含35个氨基酸,等电点为5.49,相对分子质量为8648.38,氨基酸组成中丙氨酸、苏氨酸含量分别占37.1%、34.3%;其二级结构中,α-螺旋、β-折叠、无规卷曲分别占37.14%、25.71%、25.71%。制备了该蛋白的多克隆抗体,用荧光显微镜验证ASFV H3蛋白的表达。通过核定位序列预测该蛋白定位于细胞质和细胞核中;构建H3蛋白的真核表达质粒,通过间接免疫荧光试验证实该蛋白定位于细胞质和细胞核。这为进一步揭示H3基因功能奠定了一定基础。为后续深入探讨H3基因功能提供了理论依据。
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