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欧亚类禽H1N1猪流感病毒适应性突变氨基酸的鉴定及其功能分析

文献类型： 中文期刊

作者： 万云飞;杨玉莹;张乃心;许萌萌;于钦浩;乔传玲;陈化兰

作者机构：

关键词： H1N1;猪流感病毒;复制;适应性突变

期刊名称：中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2025 年 58 卷 10 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 【目的】A型流感病毒通过适应性突变跨越种间屏障，感染包括人类在内的多种哺乳动物，对全球公共卫生构成持续威胁。基于细胞传代培养鉴定流感病毒发生的适应性突变，并对突变氨基酸的功能进行分析，为流感的监测和防控提供理论指导。【方法】将一株欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)(A/swine/Zhejiang/199/2013，简称ZJ199)在MDCK细胞中传代培养，测序发现病毒在第3代发生适应性突变，并将其命名为ZJ199-P3。之后比较ZJ199与ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力和对小鼠的感染性。建立ZJ199的反向遗传系统，并以rZJ199为骨架拯救分别含有单点突变的重组病毒,测定亲本病毒和单点突变重组病毒在体外的复制能力，确定影响病毒复制的关键氨基酸位点；通过测定病毒聚合酶活性、神经氨酸酶活性以及ISRE和NF-κB报告基因活性，确定病毒适应性突变对病毒生物学活性的影响。【结果】分析比较ZJ199与ZJ199-P3病毒的氨基酸序列，结果发现ZJ199-P3病毒在NP、NA和NS2蛋白分别含有A234T、S21G和M100I突变。测定ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力，结果与ZJ199病毒相比，ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力均下降。利用反向遗传技术，分别拯救了病毒rZJ99及单点突变病毒rZJ199-NA-S21G、rZJ199-NP-A234T和rZJ199-NS2-M100I；体外复制能力测定结果显示与rZJ199病毒相比，NP蛋白A234T突变导致rZJ199-NP-A234T病毒复制能力下降，而NA蛋白S21G和NS2蛋白M100I突变对病毒的复制能力无明显影响。进一步研究发现，NP蛋白A234T突变导致病毒聚合酶活性下降；NA蛋白S21G突变导致病毒神经氨酸酶活性下降；NS2蛋白M100I突变减弱了对ISRE和NF-κB报告基因活性的抑制作用。【结论】通过在细胞上的传代培养，鉴定了EA H1N1 SIV的3个适应性突变氨基酸，发现NP蛋白A234T突变通过降低病毒聚合酶活性，使得病毒的体外复制能力下降；NA蛋白S21G突变和NS2蛋白M100I突变均影响病毒的生物学活性。以上突变氨基酸的发现，提示我们需进一步加强流感病毒的监测，为流感的防控提供科学依据。

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