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羊痘野毒感染与弱毒免疫iELISA鉴别诊断方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 李慧霞;朱学亮;刘振勇;窦永喜;李辉;骆学农;才学鹏

作者机构：

关键词： 山羊痘病毒;绵羊痘病毒;ORF95基因;ORF103基因;间接酶联免疫吸附试验

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 07 期

页码： 701-706

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET-95和pET-103,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析后,用纯化的两种重组蛋白进行iELISA方法研究。结果显示,ORF95和ORF103大小分别为483bp和570bp,重组菌经1mmol/L IPTG诱导5h后,分别在30ku和35ku处有高水平的融合表达,且均以包涵体形式存在。两种目的蛋白以10ng+20ng混合作为包被抗原时,该iELISA方法检测羊痘自然感染血清、弱毒疫苗免疫羊血清和阴性血清的D450nm有明显差异,且与口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒无交叉反应。因此,该方法能有效排除羊痘弱毒疫苗免疫造成的干扰,可特异性检测羊痘野毒感染的血清样品。

分类号： S855.3

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