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铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究

文献类型： 中文期刊

作者： 岳明;丁宏标;乔宇

作者机构：

关键词： 海藻酸裂解酶;毕赤酵母;海藻寡糖;诱导表达

期刊名称：中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2008 年 41 卷 04 期

页码： 1192-1198

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过构建毕赤酵母工程菌株,以期获得重组海藻酸裂解酶,并对其性质加以研究。【方法】采用PCR的方法,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL。重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中表达。【结果】用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到40kD的目的蛋白,酶活力达540U·ml-1左右。经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20～45℃,pH3.0～12.0具有较好的稳定性。50mmol·L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用,Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用。在重组酶的辅助作用下,抗生素的抑菌效果明显提高。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶,为其今后在工农业中的应用奠定了基础。

分类号： Q78

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