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靶向山羊痘病毒GPCR基因SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张红强;任善会;姚威;龚真莉;杨雪;马春玲;尤婷;张玉哲;柳民意;钱文洁;李柳杨;余志鹏;孙跃峰;陈豪泰;樊江峰

作者机构：

关键词： 山羊痘病毒;GPCR;荧光定量PCR

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 基于山羊痘病毒（goat pox virus， GTPV）的基因组序列，建立靶向G蛋白偶联趋化因子受体（G-protein-coupled chemokine receptor，GPCR）基因的荧光定量PCR检测方法。基于GTPV全基因序列设计了六对qPCR引物，并进行特异性和灵敏性的筛选和检测，最终筛选得到一对高特异性和灵敏性的荧光定量PCR引物；根据GTPV/AV41疫苗株GPCR基因序列，设计普通PCR引物，扩增GPCR基因，构建真核表达载体，建立荧光定量PCR标准曲线。结果：筛选得到一对靶向于GPCR基因的特异性qPCR引物；构建了pCAGGS-GPCR真核表达质粒，建立了标准曲线Y= -3.5289x+49.07，线性相关系数R2=0.997 2，扩增效率为92.7%；验证性实验结果显示该引物最低检测限为2.0拷贝数·μL-1，各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%，表明其具有特异性强、重复性好和灵敏度高的优点。建立了靶向山羊痘病毒GPCR基因的qPCR检测方法。为防控山羊痘提供了高效的检测手段。

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