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稳定表达LSDV ORF141基因MDBK细胞系的建立及生物学特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 铁铃铃;杨雪;李瑞琪;白小龙;王会宝;殷相平;任善会;谢金鑫

作者机构：

关键词： 牛结节性皮肤病病毒;ORF141基因;MDBK细胞系;慢病毒包装系统

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在构建稳定表达牛结节性皮肤病病毒（LSDV）ORF141基因的MDBK细胞系，为深入研究该基因的生物学功能及病毒感染致病机制提供试验材料。通过PCR扩增LSDV ORF141基因，并利用同源重组方法将其克隆至慢病毒穿梭载体pLv-EF1a-MCS-Hygromycin中，从而构建出重组质粒pLv-Hygro-LSDV-ORF141。将该重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞包装产生慢病毒颗粒，转导MDBK细胞后经潮霉素抗性筛选和有限稀释法获得单克隆细胞株。通过蛋白免疫印迹和间接免疫荧光实验验证ORF141基因在MDBK细胞中的稳定表达，且该基因主要定位于细胞核。结果显示，成功获得一株可稳定高效表达ORF141基因的MDBK细胞株，命名为MDBK-LSDV ORF141。本研究为后续探究ORF141基因的生物学功能及阐述LSDV致病机制的奠定了细胞模型和理论基础。

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