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日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 孙毅;贾人初;刘金明;苑纯秀;石耀军;陆珂;傅志强;孙焕;蔡幼民;林矫矫

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;噬菌体展示cDNA文库;成虫

期刊名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志

ISSN： 1000-7423

年卷期： 2007 年 25 卷 05 期

页码： 406-410

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。方法用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,再用EcoRⅠ和HindⅢ消化,使其成为两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA。收集300bp以上的双链cDNA片段,与T7Select 10-3b载体连接,经体外包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。通过滴度测定及PCR技术鉴定文库质量,用7种特异性引物以PCR法从文库中钓取目的基因以检测文库的代表性。结果原始文库的库容量为4.98×106pfu,扩增后文库滴度为3.85×1011pfu/ml。对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300bp。7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因。结论构建了日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。

分类号： R383

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