文献类型： 中文期刊
作者： 赵改红;张涛清;向志达;张元峰;李江南;翁长江
作者机构：
关键词： 非洲猪瘟病毒;p54蛋白;多克隆抗体
期刊名称：中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2023 年 1 期
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 本研究以ASFV Pig/HLJ/18分离株基因组DNA为模板扩增tE183L基因片段,构建重组原核表达质粒pET-21a-tE183L.将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达可溶性p54蛋白,并将采用镍亲和层析柱和分子筛纯化的p54与弗氏佐剂等比混合后免疫新西兰大白兔,采集血清经Protein G亲和层析纯化得到兔抗p54多克隆抗体.研究结果表明,构建的原核表达质粒pET-21a-tE183L可成功表达p54蛋白且纯度较高.Western blot、间接免疫荧光和免疫沉淀试验结果显示,纯化的抗p54多克隆抗体能特异性识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-ASFV p54蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞(PAMs)后表达的ASFV p54蛋白.本研究成功表达和纯化p54可溶性蛋白;制备的多克隆抗体有良好的特异性,这为深入探讨ASFV p54蛋白的生物学功能奠定了基础.
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