数字农科院2.0

重组小反刍兽疫病毒血凝素蛋白纯化体系的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 胡林杰;朱学亮;彭泓蛟;邓瑞雪;潘春容;孙跃峰;蒙学莲

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫病毒;血凝素蛋白;蛋白纯化;优化

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本试验利用发酵技术诱导表达了小反刍兽疫病毒H蛋白胞外区（PPRV tH），优化建立了一套纯化重组PPRV tH的完整工艺体系。通过发酵表达获得的10 L菌液，菌体湿重约达30 g/L，均质机破碎菌体获得包涵体；Tris-0缓冲液（pH为8.0）洗涤包涵体3次，按每1 g包涵体加入5 mL含20 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液（pH为8.0）重悬，4 ℃温和旋转溶解过夜，离心收集上清；按体积比1∶2将层析填料Chelaing Sepharose Fast Flow与上清混匀，以流速1～2 mL/min加入层析柱；依次通过10倍柱体积含50、100、400和500 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液（pH为8.0），4 ℃静置2 h进行洗脱。通过优化后的纯化体系可得到较纯的重组PPRV tH蛋白，利用灰度分析可知纯化后的重组PPRV tH蛋白纯度能达到85%。本试验提供的纯化体系可快速、简便、低成本、大批量纯化重组PPRV tH蛋白，而且纯化获得的PPRV tH蛋白具有良好的反应原性。

分类号：

  • 相关文献

[1]犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定. 虞一聪,冯娜,闫飞虎,盖微微,王铁成,王化磊,郑学星,赵永坤,黄耕. 2015

[2]表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究. 田美杰,葛金英,王喜军,冯娜,马良,帅磊,苏华,高玉伟,夏咸柱,步志高. 2012

[3]核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体. 李越,王伟,赵颖慧,周长良,臧凤霞,冉多良,孟庆文,陈洪岩. 2014

[4]小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用. 蒙学莲,窦永喜,朱学亮,骆学农,才学鹏. 2014

[5]水貂狐狸及貉源犬瘟热病毒H基因的克隆与序列分析. 朱春生,赵建军,白雪,张海玲,胡博. 2014

[6]H7N9亚型流感病毒特异性中和抗体的筛选及其表位的鉴定. 申汶涛,王倩,王正祥,朱启运,徐帅. 2022

[7]犬瘟热病毒截短P蛋白的表达及纯化. 李爽,易立,程悦宁,曹智刚,林鹏,程世鹏. 2019

[8]甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备. 胡文,孟春春,李传峰,陈宗艳,梁瑞英,李宁,黄云秀,吴润,刘光清. 2014

[9]牛分枝杆菌融合基因ESAT6-MPB63-HSP65的原核表达及鉴定. 郝辉,侯绍华,丁家波,毛开荣,朱鸿飞. 2009

[10]狂犬病病毒N、G两种蛋白在间接ELISA方法中的应用比较. 王净,史利军,李刚,孙全文,吴淑琴. 2013

[11]一种促进植物根系生长的极细链格孢菌蛋白质分离、纯化和生物功能. 杨秀芬,张明,袁京京,邱德文. 2007

[12]裂谷热病毒Gn蛋白主要抗原区的表达、纯化及抗原性分析. 夏鹏,魏建超,陆莹梅,武专昌,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,钟登科. 2015

[13]小麦泛素结合酶TaE2的表达分析及蛋白互作. 尹丽娟,陈阳,刘沛,陈明,李连城,徐兆师,马有志. 2014

[14]猪干扰素-γ基因的表达、纯化及活性分析. 潘晓梅,窦永喜,骆学农,刘琼,张冬峰,岳城,才学鹏. 2009

[15]转基因玉米中植酸酶蛋白免疫亲和纯化体系的建立. 赵倩倩,周晓今,柳小庆,杨文竹,李素贞,刘奇,陈茹梅. 2013

[16]暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析. 张鑫鑫,刘丹丹,李克斌,张帅,曹雅忠,樊东,尹姣. 2016

[17]狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立. 宫苗苗,曾妮,程朝飞,李刚. 2013

[18]牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化. 曹丽,高维凡,温永俊. 2014

[19]禽流感病毒NS1蛋白在杆状病毒表达系统中的表达. 李东卫,郭莹莹,刘在斯,王世达,沈楠,文辉强,焦同路,王靖飞. 2012

[20]烟草NteIF2α的原核表达、纯化及多克隆抗体制备和应用. 陈德鑫,李雯雯,李思斌,李宁,郭豪,龙月,杨永霞,贾红昉,张洪映,崔红,张松涛. 2016

作者其他论文 更多>>