文献类型： 中文期刊
作者： 张玉哲;任善会;姚威;龚真莉;张红强;柳民意;尤婷;王相伟;李积雲;殷相平;孙跃峰;陈豪泰;万学瑞
作者机构：
关键词： 牛结节性皮肤病病毒;TK基因;Cre/Loxp系统;重组毒株
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 利用同源重组技术及Cre-Loxp系统平台，构建牛结节性皮肤病病毒（lumpy skin disease virus， LSDV）缺失TK基因毒株，为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因，利用Cre-Loxp系统平台，红色荧光蛋白（RFP）为筛选标记，采用重叠PCR方法扩增左、右同源臂以及RFP基因表达框并进行融合，将其克隆至pUC19T载体，构建基因缺失转移载体pUC19T-LSDV-△TK-RFP。将转移载体重组质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，构建LSDV-△TK-RFP重组病毒。采取蚀斑法、有限稀释法纯化LSDV-△TK-RFP。然后，利用Cre-Loxp系统，在MDBK-Cre细胞中从病毒基因组中切除RFP标签，采取蚀斑法和有限稀释法筛选并纯化LSDV-△TK毒株。利用PCR及测序方法对重组毒株进行鉴定，并测定其一步生长曲线。结果表明成功构建缺失TK基因的重组毒株（LSDV-△TK），重组毒株复制力略低于野生毒株。应用Cre-Loxp系统构建的缺失TK基因LSDV毒株，具有良好的遗传稳定性和复制生长特性，为后续LSDV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株，同时拓展了Cre-Loxp系统的应用范围。
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