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TRIF敲除NA与BHK-21细胞系的构建及对狂犬病病毒增殖效率的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 黄伟涛;李家琪;彭瑶;殷相平;郭霄峰;罗均

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;β干扰素TIR结构域衔接蛋白基因;基因敲除;狂犬病病毒

期刊名称：华南农业大学学报

ISSN： 1001-411X

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 【目的】通过CRISPR/Cas9技术构建β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TRIF）基因敲除小鼠NA细胞系与仓鼠BHK-21细胞系，评估狂犬病病毒（Rabies virus，RABV）在敲除细胞系中的增殖能力。【方法】首先设计单向导RNA（Single guide RNA，sgRNA），构建用于TRIF基因敲除的重组质粒pSpCasp9-NA-TRIF-KO和pSpCasp9-BHK-21-TRIF-KO。将上述质粒转染细胞后，通过嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，并使用有限稀释法获得单细胞亚克隆。随后，对筛选的细胞扩大培养，并通过PCR扩增与测序以及Western blot鉴定，最终筛选TRIF敲除NA与BHK-21细胞系。最后将RABV标准攻击毒株CVS-11与疫苗毒株BNSP-SAD分别接种TRIF敲除细胞系与野生型细胞系，通过Western blot检测病毒N蛋白的表达水平，并利用TCID50检测病毒滴度，以评估RABV在不同细胞系中的增殖能力。【结果】成功构建了用于TRIF基因敲除的pSpCasp9-NA-TRIF-KO与pSpCasp9-BHK-21-TRIF-KO，并筛选鉴定出TRIF基因敲除NA细胞系与BHK-21细胞系。与野生型细胞系相比，2种TRIF敲除细胞系接种RABV CVS-11与BNSP-SAD后N蛋白的表达量均在感染24 h后明显升高，病毒TCID50同样在感染24 h后均显著上升。【结论】RABV在TRIF基因敲除细胞系中的增殖能力优于野生型细胞系，TRIF可能具有抑制病毒复制的能力。研究结果为深入研究TRIF功能提供了有力支持，也为RABV的培养与研究提供了新的细胞模型。

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