文献类型： 中文期刊
作者： 王芳萍;任善会;郜晓虹;杨雪;李积雲;王相伟;殷相平;孙跃峰;陈豪泰;万学瑞
作者机构：
关键词： 牛结节性皮肤病病毒;ORF123基因;增殖能力;同源重组;重组病毒
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒（LSDV）ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP基因表达框，克隆至pUC-19T载体，构建基因缺失转移载体pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒。然后将pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，利用蚀斑、梯度稀释和挑取绿色荧光单克隆细胞筛选纯化重组毒株，并鉴定其遗传稳定性和增殖能力。结果显示，利用EGFP筛选标记，通过多次挑斑筛选纯化获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP。该重组病毒至少在8代细胞传代中能稳定表达绿色荧光蛋白，接种MDBK细胞后绘制一步增殖曲线表明该重组病毒滴度略低于亲本毒株。本研究成功获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP，为LSDV ORF123蛋白生物学功能研究以及减毒活疫苗的研制奠定基础。
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