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基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立

文献类型: 中文期刊

作者: 马春玲;任善会;杨雪;蔺玉刚;李积雲;王相伟;殷相平;孙跃峰;万学瑞;陈豪泰

作者机构:

关键词: 牛结节性皮肤病病毒;ORF61;MGB探针;荧光定量PCR

期刊名称:畜牧兽医学报

ISSN: 0366-6964

年卷期: 2024 年

页码:

收录情况: 北大核心(2023版) ; ; CSCD(2023-2024年度) ; ; 科技核心(2024版) ; ; 农林核心(2020版)

摘要: 基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究中基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终,筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物;利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒,获得标准曲线y = -3.287 5x + 47.87,线性相关系数R2=0.998 6,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性试验、重复性试验和灵敏性试验结果表明该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度等优点;该引物的最低检测限为6.71拷贝数·μL-1,各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。以上结果表明,作者建立特异性针LSDV的荧光定量PCR检测方法,为LSD预防和控制提供有效的检测手段。

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