文献类型： 中文期刊
作者： 柳民意;任善会;高小龙;姚威;杨雪;尤婷;张玉哲;张红强;钱文洁;李柳杨;余志鹏;孙跃峰;陈豪泰;樊江峰
作者机构：
关键词： 小反刍兽疫;绵羊淋巴细胞信号活化分子(SLAM);原核表达;多克隆抗体
期刊名称：甘肃农业大学学报
ISSN： 1003-4315
年卷期： 2025 年 60 卷 6 期
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 【目的】制备绵羊淋巴细胞信号活化分子(signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)多克隆抗体。【方法】采用PCR方法扩增绵羊SLAM基因,并将其克隆至pET-28a载体,构建重组载体pET-28a-Sheep-SLAM。经PCR和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta中,用IPTG诱导目的蛋白表达并优化表达条件。使用His标签镍柱,纯化重组SLAM蛋白并免疫小鼠制备多克隆抗体,用Western-blot和间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。【结果】PCR扩增的绵羊SLAM基因大小在1094 bp左右,符合预期结果。通过菌液PCR、双酶切鉴定和测序验证,获得重组阳性质粒pET-28a-Sheep-SLAM。IPTG诱导后表达的目的蛋白分子质量约为40.1 kU,且在24℃、IPTG终浓度为0.5 mmol/L、诱导10 h时表达量最高。Western-blot和IFA检测结果显示,蛋白在上清和包涵体中均有表达,但以包涵体表达为主。【结论】制备的绵羊SLAM多克隆抗体与绵羊和山羊的SLAM蛋白均能发生特异性反应,抗体效价达1∶60000,抗体反应性良好。
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